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產(chǎn)品中文名：人冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白(CIRP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

指標(biāo)別名：CIRBP

指標(biāo)簡介：催冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白（cold inducible RNA-binding protein, CIRP）是一種RNA結(jié)合蛋白，屬于冷休克蛋白家族，廣泛表達(dá)于各種組織細(xì)胞中, 且在冷應(yīng)激、缺氧、紫外線照射等過程中過量表達(dá)。CIRP在細(xì)胞內(nèi)外的定位不同，則其作用不同。細(xì)胞內(nèi)CIRP（intracellular CIRP, iCIRP）是在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)合成的，然后再回到細(xì)胞核并作為RNA伴侶與mRNA非特異性結(jié)合，在細(xì)胞核內(nèi)起到穩(wěn)定RNA，防止RNA降解并調(diào)節(jié)RNA轉(zhuǎn)錄的作用；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)iCIRP則調(diào)節(jié)mRNA的翻譯重編程；而iCIRP被釋放到細(xì)胞外，即細(xì)胞外CIRP（extracellular CIRP, eCIRP），則發(fā)揮著炎癥介質(zhì)的作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)CIRP在感染性/非感染性炎癥疾病和缺血-再灌注損傷中發(fā)揮著重要作用。

檢測范圍：15.6–1000pg/ml

靈敏度：＜2.84pg/ml

精密度：板內(nèi)變異系數(shù)均＜9%，板間變異系數(shù)均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個月

檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標(biāo)板已包被捕獲抗體，實(shí)驗(yàn)時將待檢樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）加入酶標(biāo)板反應(yīng)孔中，捕獲抗體結(jié)合目的蛋白。加入生物素標(biāo)記檢測抗體與目的蛋白結(jié)合，再加入 SABC 與標(biāo)記抗體結(jié)合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測抗體-SABC 免疫復(fù)合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關(guān)，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測�；�?qū)⑸锨逯糜凇?-20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內(nèi)置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。可以對勻漿液進(jìn)行反復(fù)凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測（如需要可取部分上清進(jìn)行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

4、細(xì)胞裂解液：貼壁細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集到的細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到10^6個/ml 左右。通過反復(fù)凍融或超聲破碎使細(xì)胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。或取上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

5、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。樣本處理相關(guān)試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號：U31-324C）。

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