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產(chǎn)品中文名：大鼠甲狀旁腺素(PTH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

指標(biāo)別名：Parathyroid Hormone；FIH1;PTH1;iPTH;Intact Parathyroid Hormone;Parathormone;Parathyrin

指標(biāo)簡介：甲狀旁腺素（PTH），又稱副甲狀腺素，是一種由甲狀旁腺分泌的多肽激素， 通過對骨骼、腎臟和腸道的影響來調(diào)節(jié)血清鈣濃度。PTH 影響骨重塑，而骨 重塑是一個持續(xù)的過程，隨著時間的推移，骨組織會交替地被吸收和重建。 PTH 是在血清鈣（Ca2+）水平較低時分泌的。PTH 間接刺激骨基質(zhì)內(nèi)破骨 細(xì)胞的活動，以釋放更多的離子鈣（Ca2+）到血液中，提高低血清鈣水平。 PTH 主要由甲狀旁腺的主細(xì)胞分泌，它是一種含有 84 個氨基酸的多肽，分 子質(zhì)量約為 9500Da，是一種原激素，它的作用受到降鈣素的反對。PTH 受 體有兩種類型，甲狀旁腺激素 1 受體由 PTH 的 34 個 N 端氨基酸激活，大量 存在于骨骼和腎臟細(xì)胞中，甲狀旁腺激素 2 受體大量存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、 胰腺、睪丸和胎盤的細(xì)胞中。產(chǎn)生 PTH 過少或過多的疾病，如甲狀旁腺功能 減退癥、甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥和副腫瘤綜合征，可引起骨病、低鈣血癥和高 鈣血癥。

檢測范圍：15.6–1000pg/mL

靈敏度：＜2.84pg/ml

精密度：板內(nèi)變異系數(shù)均＜9%，板間變異系數(shù)均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個月

檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標(biāo)板已包被捕獲抗體，實驗時將待檢樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）加入酶標(biāo)板反應(yīng)孔中，捕獲抗體結(jié)合目的蛋白。加入生物素標(biāo)記檢測抗體與目的蛋白結(jié)合，再加入 SABC 與標(biāo)記抗體結(jié)合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測抗體-SABC 免疫復(fù)合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關(guān)，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測�；�?qū)⑸锨逯糜凇?-20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內(nèi)置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨�？梢詫驖{液進(jìn)行反復(fù)凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測（如需要可取部分上清進(jìn)行 BCA 蛋白定量）�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

4、細(xì)胞裂解液：貼壁細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集到的細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到10^6個/ml 左右。通過反復(fù)凍融或超聲破碎使細(xì)胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

5、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。樣本處理相關(guān)試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號：U31-324C）。

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