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產(chǎn)品中文名：大鼠組織蛋白酶D(Cathepsin D)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

指標(biāo)別名：cathepsin D; CLN10; CPSD; CTSD

指標(biāo)簡介：組織蛋白酶D是由CTSD基因編碼的蛋白質(zhì)。組織蛋白酶D是一種溶酶體天冬氨酰蛋白酶，在低pH下會(huì)被激活。它廣泛存在于脊椎動(dòng)物、真菌、反轉(zhuǎn)錄病毒和一些植物病毒中。通常情況下，組織蛋白酶D首先在糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中合成沒有催化活性的前體酶原，去除信號(hào)肽后進(jìn)入高爾基體進(jìn)行蛋白的切割和加工，最終通過甘露糖-6-磷酸途徑進(jìn)入溶酶體中。在哺乳動(dòng)物中，具有活性的成熟蛋白形式含有l(wèi)條輕鏈和1條重鏈。組織蛋白酶D廣泛表達(dá)，并參與蛋白水解降解，細(xì)胞侵襲和細(xì)胞凋亡。組織蛋白酶D基因的突變與幾種疾病的發(fā)病機(jī)理有關(guān)，包括乳腺癌和可能的阿爾茨海默氏病在內(nèi)的多種疾病，并且已被認(rèn)為是乳腺癌的腫瘤標(biāo)志物。

檢測范圍：0.156–10ng/ml

靈敏度：＜0.03ng/ml

精密度：板內(nèi)變異系數(shù)均＜9%，板間變異系數(shù)均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個(gè)月

檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標(biāo)板已包被捕獲抗體，實(shí)驗(yàn)時(shí)將待檢樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）加入酶標(biāo)板反應(yīng)孔中，捕獲抗體結(jié)合目的蛋白。加入生物素標(biāo)記檢測抗體與目的蛋白結(jié)合，再加入 SABC 與標(biāo)記抗體結(jié)合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測抗體-SABC 免疫復(fù)合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關(guān)，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。或?qū)⑸锨逯糜凇?-20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內(nèi)置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測。或取上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨�？梢詫�(duì)勻漿液進(jìn)行反復(fù)凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測（如需要可取部分上清進(jìn)行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

4、細(xì)胞裂解液：貼壁細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集到的細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到10^6個(gè)/ml 左右。通過反復(fù)凍融或超聲破碎使細(xì)胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

5、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。樣本處理相關(guān)試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號(hào)：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號(hào)：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號(hào)：U31-324C）。

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