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產(chǎn)品中文名：大鼠組織蛋白酶B(Cathepsin B)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

指標(biāo)別名：APP secretase; APPS; cathepsin B; Cathepsin B1; CPSB; CTSB

指標(biāo)簡(jiǎn)介：組織蛋白酶B是一種屬于肽酶或蛋白酶家族的酶蛋白。在人類中，它是由CTSB基因編碼的。這個(gè)基因定位在8p22.3染色體上該基因編碼的蛋白質(zhì)是一個(gè)溶酶體半胱氨酸蛋白酶組成的二聚體的二硫鍵連接的重鏈和輕鏈，都從一個(gè)單一的蛋白質(zhì)前體產(chǎn)生。是肽酶C1家族的一員。組織蛋白酶B曾被懷疑是參與B-淀粉樣蛋白前體蛋白轉(zhuǎn)化為阿爾茨海默病患者淀粉樣蛋白斑塊的候選蛋白酶。然而，這一功能目前已知是由BACE 1蛋白酶介導(dǎo)的。現(xiàn)在認(rèn)為組織蛋白酶B可以將B-淀粉樣前體蛋白降解成無(wú)害的片段。因此，可以想象，組織蛋白酶B可能在阿爾茨海默病的自然防御中發(fā)揮關(guān)鍵作用。組織蛋白酶B的過(guò)度表達(dá)與食管腺癌和其他腫瘤有關(guān)。該基因至少有五個(gè)編碼相同蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄變異體被發(fā)現(xiàn)。本試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品為分子量為37KDa的重組小鼠組織蛋白酶B。

檢測(cè)范圍：156–10000pg/ml

靈敏度：＜28.36pg/ml

精密度：板內(nèi)變異系數(shù)均＜9%，板間變異系數(shù)均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個(gè)月

檢測(cè)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標(biāo)板已包被捕獲抗體，實(shí)驗(yàn)時(shí)將待檢樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）加入酶標(biāo)板反應(yīng)孔中，捕獲抗體結(jié)合目的蛋白。加入生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體與目的蛋白結(jié)合，再加入 SABC 與標(biāo)記抗體結(jié)合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測(cè)抗體-SABC 免疫復(fù)合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關(guān)，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)�；�?qū)⑸锨逯糜凇?-20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內(nèi)置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測(cè)�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨�？梢詫�(duì)勻漿液進(jìn)行反復(fù)凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)（如需要可取部分上清進(jìn)行 BCA 蛋白定量）�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

4、細(xì)胞裂解液：貼壁細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集到的細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到10^6個(gè)/ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融或超聲破碎使細(xì)胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

5、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)。樣本處理相關(guān)試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號(hào)：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號(hào)：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號(hào)：U31-324C）。

咨詢熱線：400-681-8582 021-64228065

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