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產(chǎn)品中文名：大鼠肝細胞生長因子(HGF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

指標別名：HGF; F-TCF; HGFB; HPTA; SF; Scatter Factor; Hepapoietin A; Fibroblast-Derived Tumor Cytotoxic Factor; Lung Fibroblast-Derived Mitogen

指標簡介：肝細胞生長因子（HGF），也被稱為分散因子（SF），是一種旁分泌細胞生長、運動和形態(tài)生成因子。它由間充質細胞和靶標分泌，主要作用于上皮細胞和內(nèi)皮細胞，但也作用于造血祖細胞和T細胞。它在胚胎器官發(fā)育中具有重要作用。在與原致癌c-Met受體結合后，通過激活酪氨酸激酶信號級聯(lián)反應來調節(jié)細胞生長、細胞運動和形態(tài)發(fā)生。它刺激有絲分裂、細胞運動和基質侵襲的能力使其在血管生成、腫瘤發(fā)生和組織再生中起著核心作用。它還調節(jié)T細胞進入心臟組織的趨化性。它與多種癌癥有關，包括肺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、結腸癌和乳腺癌。它表達的增加與從口腔粘膜組織中分離的成纖維細胞的增強和無疤痕傷口愈合能力有關。

檢測范圍：62.5–4000pg/ml

靈敏度：＜11.36pg/ml

精密度：板內(nèi)變異系數(shù)均＜9%，板間變異系數(shù)均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個月

檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標板已包被捕獲抗體，實驗時將待檢樣品（或標準品）加入酶標板反應孔中，捕獲抗體結合目的蛋白。加入生物素標記檢測抗體與目的蛋白結合，再加入 SABC 與標記抗體結合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測抗體-SABC 免疫復合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在 450nm 波長處檢測吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關，通過繪制標準曲線計算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。或將上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內(nèi)置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

3、組織勻漿：用預冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。可以對勻漿液進行反復凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測（如需要可取部分上清進行 BCA 蛋白定量）�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

4、細胞裂解液：貼壁細胞用預冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細胞；懸浮細胞可直接離心收集。收集到的細胞用預冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細胞懸液，細胞濃度達到10^6個/ml 左右。通過反復凍融或超聲破碎使細胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

5、細胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。樣本處理相關試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號：U31-324C）。

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