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產品中文名：大鼠CD44分子(CD44)酶聯免疫吸附測定試劑盒

指標別名：CD44; CD44 antigen; CDW44; CSPG8; ECMR III; Epican; HCELL; Heparan sulfate proteoglycan; Hermes antigen; HUTCH I; Hyaluronate receptor; IN; MC56; MDU2; MDU3; MIC4; MUTCH I; PGP 1; PGP I; Pgp1; Phagocytic glycoprotein 1; Phagocytic glycoprotein I

指標簡介：CD44是一種重要的細胞膜糖蛋白，被認為在淋巴細胞與基質的黏附、淋巴細胞活化以及淋巴結歸巢過程中發(fā)揮作用。該蛋白由19個外顯子組成，這些外顯子編碼了約50千堿基對的基因組DNA。在人類中，CD44抗原由11號染色體上的CD44基因編碼。該基因編碼的蛋白質是一種細胞表面糖蛋白，參與細胞間的相互作用、黏附和遷移過程。它能夠結合透明質酸（HA），同時還能與其他配體（如骨橋蛋白、膠原蛋白和基質金屬蛋白酶MMPs）發(fā)生相互作用。該基因的轉錄本經過復雜的可變剪接過程，產生多種功能各異的異構體，但其中一些異構體的完整結構尚未被明確。這種可變剪接機制是導致該蛋白結構和功能多樣性的關鍵因素，也可能與腫瘤轉移有關。

檢測范圍：0.312–20ng/ml

靈敏度：＜0.06ng/ml

精密度：板內變異系數均＜9%，板間變異系數均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個月

檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標板已包被捕獲抗體，實驗時將待檢樣品（或標準品）加入酶標板反應孔中，捕獲抗體結合目的蛋白。加入生物素標記檢測抗體與目的蛋白結合，再加入 SABC 與標記抗體結合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測抗體-SABC 免疫復合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在 450nm 波長處檢測吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關，通過繪制標準曲線計算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測�；驅⑸锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

3、組織勻漿：用預冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。可以對勻漿液進行反復凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測（如需要可取部分上清進行 BCA 蛋白定量）�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

4、細胞裂解液：貼壁細胞用預冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細胞；懸浮細胞可直接離心收集。收集到的細胞用預冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細胞懸液，細胞濃度達到10^6個/ml 左右。通過反復凍融或超聲破碎使細胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

5、細胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。樣本處理相關試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號：U31-324C）。

咨詢熱線：400-681-8582 021-64228065

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