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產(chǎn)品中文名：大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

指標(biāo)別名：CCL20; CKb4; LARC; MIP3-A; SCYA20; ST38; Small Inducible Cytokine Subfamily A(Cys-Cys)Member 20; Beta-Chemokine Exodus-1; Liver And Activation-Regulated Chemokine

指標(biāo)簡(jiǎn)介：巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α;CCL20)是一種屬于CC趨化因子家族的小型細(xì)胞因子。它對(duì)淋巴細(xì)胞有強(qiáng)烈的趨化作用，對(duì)中性粒細(xì)胞的吸引較弱。CCL20通過對(duì)淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞對(duì)這些組織周圍的上皮細(xì)胞的趨化作用，參與粘膜淋巴組織的形成和功能。CCL20通過結(jié)合和激活趨化因子受體CCR6而對(duì)其目標(biāo)細(xì)胞產(chǎn)生作用。它的基因表達(dá)可被微生物因素如脂多糖（LPS）和炎癥細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子和γ干擾素誘導(dǎo)，并被IL-10下調(diào)。 CCL20的基因（scya20）位于2號(hào)染色體。

檢測(cè)范圍：31.2–2000pg/ml

靈敏度：＜5.67pg/ml

精密度：板內(nèi)變異系數(shù)均＜9%，板間變異系數(shù)均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個(gè)月

檢測(cè)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標(biāo)板已包被捕獲抗體，實(shí)驗(yàn)時(shí)將待檢樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）加入酶標(biāo)板反應(yīng)孔中，捕獲抗體結(jié)合目的蛋白。加入生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體與目的蛋白結(jié)合，再加入 SABC 與標(biāo)記抗體結(jié)合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測(cè)抗體-SABC 免疫復(fù)合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測(cè)吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關(guān)，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)。或?qū)⑸锨逯糜凇?-20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內(nèi)置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測(cè)。或取上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。可以對(duì)勻漿液進(jìn)行反復(fù)凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)（如需要可取部分上清進(jìn)行 BCA 蛋白定量）�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

4、細(xì)胞裂解液：貼壁細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集到的細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到10^6個(gè)/ml 左右。通過反復(fù)凍融或超聲破碎使細(xì)胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

5、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)。樣本處理相關(guān)試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號(hào)：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號(hào)：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號(hào)：U31-324C）。

咨詢熱線：400-681-8582 021-64228065

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