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產(chǎn)品中文名：大鼠趨化因子C-C-基元配體11(CCL11)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

指標(biāo)別名：C-C motif chemokine 11; CCL11; chemokine (C-C motif) ligand 11; Eosinophil chemotactic protein; Eotaxin; eotaxin-1; MGC22554; SCYA11Small-inducible cytokine A11; small inducible cytokine subfamily A (Cys-Cys), member 11 (eotaxin)

指標(biāo)簡介：Eotaxin（也稱為CCL11）是一種強(qiáng)效的嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子誘導(dǎo)劑，被認(rèn)為是CC趨化因子受體3（CCR3）的選擇性配體，該受體存在于嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和Th2淋巴細(xì)胞表面。Eotaxin被認(rèn)為與多種嗜酸性粒細(xì)胞相關(guān)炎癥性疾病有關(guān)，如特應(yīng)性皮炎、過敏性鼻炎、哮喘和寄生蟲感染。該基因位于17號(hào)染色體上，在小腸和結(jié)腸中以高水平持續(xù)表達(dá)，在其他多種組織中的表達(dá)量較低。其成熟蛋白序列與人類單核細(xì)胞趨化因子蛋白-1的相似度為66%，與豚鼠eotaxin的相似度為60%。在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的重組人eotaxin能夠誘導(dǎo)正常人嗜酸性粒細(xì)胞產(chǎn)生鈣離子內(nèi)流反應(yīng)，但對(duì)中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞則無此效應(yīng)。人類eotaxin基因的氨基酸序列與豚鼠和小鼠eotaxin的相似度分別為61.8%和63.2%。

檢測(cè)范圍：15.6–1000pg/ml

靈敏度：＜2.84pg/ml

精密度：板內(nèi)變異系數(shù)均＜9%，板間變異系數(shù)均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個(gè)月

檢測(cè)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標(biāo)板已包被捕獲抗體，實(shí)驗(yàn)時(shí)將待檢樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）加入酶標(biāo)板反應(yīng)孔中，捕獲抗體結(jié)合目的蛋白。加入生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體與目的蛋白結(jié)合，再加入 SABC 與標(biāo)記抗體結(jié)合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測(cè)抗體-SABC 免疫復(fù)合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測(cè)吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關(guān)，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)�；�?qū)⑸锨逯糜凇?-20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內(nèi)置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測(cè)。或取上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨�？梢詫�(duì)勻漿液進(jìn)行反復(fù)凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)（如需要可取部分上清進(jìn)行 BCA 蛋白定量）�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

4、細(xì)胞裂解液：貼壁細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集到的細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到10^6個(gè)/ml 左右。通過反復(fù)凍融或超聲破碎使細(xì)胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)。或取上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。

5、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)。樣本處理相關(guān)試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號(hào)：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號(hào)：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號(hào)：U31-324C）。

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