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產(chǎn)品描述： 

本產(chǎn)品是一種基于Calcein-AM（鈣黃綠素AM）和PI（碘化丙啶）的雙熒光染色法快速便捷地檢測體外培養(yǎng)的細胞中活細胞和死細胞的試劑。

Calcein-AM是一種可以對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑，因其在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基團，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細胞膜。一旦進入細胞，本身不發(fā)熒光的Calcein-AM被活細胞內(nèi)的酯酶水解，形成膜非滲透性的帶有強負電荷的極性分子Calcein，從而被滯留在活細胞內(nèi)并發(fā)出強綠色熒光(Ex=490nm, Em=515nm)。由于死細胞缺乏酯酶或酯酶活性很低，因此死細胞不能或很少產(chǎn)生Calcein，不能被染色或者染色非常弱。Calcein-AM僅用于對活細胞的細胞生存能力測試和短期標記。

碘化丙啶(Propidium iodide, PI)不能穿過活細胞的細胞膜，僅能穿過死細胞膜的無序區(qū)域而到達細胞核，并嵌入細胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(Ex=535nm, Em=615nm)，因此PI僅對死細胞染色。因此，Calcein-AM常常與死細胞熒光探針如碘化丙啶(PI)等聯(lián)合使用，同時進行活細胞和死細胞的熒光雙重染色，用于細胞活性與細胞毒性的檢測。

本試劑盒適用于熒光顯微鏡、熒光酶標儀及其它熒光檢測系統(tǒng)。僅需染色15-30分鐘，就可在熒光顯微鏡下觀察到非常明亮的活細胞綠色熒光染色和壞死細胞中非常明亮的細胞核紅色熒光染色。

使用說明：

1、配制Calcein-AM/PI工作液：（推薦Calcein-AM：2μM, PI：4μM）分別取10μl的Calcein-AM和20μl的PI儲存溶液，加入至5ml的PBS中，充分混勻，備用（注：Calcein-AM/PI工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，并且在當天用完）；

2、去除細胞培養(yǎng)液，用PBS洗滌細胞2次，去除培養(yǎng)液中的血清或酚紅對本實驗的干擾。

3、加入適量的Calcein-AM/PI工作液（細胞被覆蓋完全即可，建議96孔板每孔100μl，24孔板每孔加入250μl，12孔板每孔加入500μl，6孔板每孔加入1ml），在37℃培養(yǎng)箱中孵育15-30min（不同的細胞最佳孵育時間有所不同，可以根據(jù)實際染色效果對染色時間進行適當調(diào)整和優(yōu)化，以得到更加理想的染色效果）；

4、用PBS洗滌細胞2次；

5、熒光顯微鏡下觀察細胞染色結果，Calcein-AM檢測波長：Ex=490nm（藍光激發(fā)）, Em=515nm；PI檢測波長：Ex=535nm（綠光激發(fā)）, Em=615nm。