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產(chǎn)品描述：

新型轉(zhuǎn)染試劑U-200 Transfection Reagent是一種新型陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，適用于將核酸（DNA和RNA）轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞，可在各種哺乳動(dòng)物貼壁和懸浮細(xì)胞系中提供高效轉(zhuǎn)染，同時(shí)具有極低的細(xì)胞毒性。

本產(chǎn)品適用細(xì)胞類型廣，轉(zhuǎn)染時(shí)血清和抗生素的存在不影響轉(zhuǎn)染效率，并且轉(zhuǎn)染可以無需更換培養(yǎng)基。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、轉(zhuǎn)染效率高。

2、細(xì)胞毒性極低（細(xì)胞存活率>90%）。

3、操作簡便，轉(zhuǎn)染后無需更換培養(yǎng)基。

4、適用于高通量應(yīng)用的可靠性能。

5、適用于各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染。

使用說明：

不同的核酸類型、細(xì)胞類型和不同面積的孔板轉(zhuǎn)染操作略有不同，以24孔板siRNA轉(zhuǎn)染為例。

1、接種細(xì)胞：

對于貼壁細(xì)胞，提前將細(xì)胞接種在24孔板中，過夜培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁且細(xì)胞匯合度在30%-50%時(shí)轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前全培養(yǎng)基總量為0.45ml。

對于懸浮細(xì)胞，采用對數(shù)生長期的細(xì)胞，數(shù)量為常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)的1/3時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

2、轉(zhuǎn)染步驟：

（1）取一無菌無酶離心管加入無血清稀釋液和10pmol的siRNA，充分混勻，制成終體積為25μl的RNA稀釋液（無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM或1640），室溫靜置5min。

（2）取另一新的無菌無酶離心管加入24.5ul無血清稀釋液和0.5ul的U-200，充分混勻，制成終體積為25μl的U-200稀釋液，室溫靜置5min。

（3）將R100稀釋液和RNA稀釋液混合并輕輕吹打均勻，室溫靜置20min即完成轉(zhuǎn)染復(fù)合物的制備。

（4）將50μl轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加到含有0.45ml完全培養(yǎng)基（可含10%血清和抗生素）的孔中，混合均勻。

（5）轉(zhuǎn)染后4-6小時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)，如狀態(tài)良好可不必更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24-72小時(shí)得到結(jié)果。

3、優(yōu)化：

由于核酸序列差異、合成條件不同以及是否帶有熒光等標(biāo)記，決定了核酸和轉(zhuǎn)染試劑在不同情況下會(huì)有不同的最佳條件，建議先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。根據(jù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果，固定RNA(μg)：轉(zhuǎn)染試劑量(μl)的比值，按培養(yǎng)器皿表面積比例應(yīng)用到其他培養(yǎng)容器。

使用范圍：

僅限科研使用，不能應(yīng)用于臨床。

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