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產品描述：

攸碧艾的高效轉染試劑U-300 Transfection Reagent是采用新型脂質體納米顆粒技術，適用于將核酸（DNA和RNA）轉染入真核細胞，轉染性能卓越，可提高細胞活性，廣泛適用于難轉染的及常見的細胞種類。本轉染試劑對細胞作用溫和，毒性很低。

產品特點：

1、提供卓越的性能，以針對難轉染的細胞系實現了較高轉染效率的試劑。

2、轉染試劑對細胞作用溫和，毒性很低。

3、相比其他轉染試劑具有更高的轉染效率和更低的用量。

4、適用細胞更加廣泛，有效轉染難于轉染的細胞系。

能有效轉染的細胞類型包括：肺癌細胞（A549、NCI-H460）、骨肉瘤細胞（U-2OS、Saos-2）、結腸癌細胞（Caco2、SW480）、胰腺癌細胞（PANC-1）、皮膚黑色素瘤細胞（SK-MEL-28）成纖維細胞（3T3、COS-7）、肝細胞（HepG2、HuH7）紅白血病細胞（K562）、乳腺癌細胞（MCF-7、Hs578T）前列腺癌細胞（LNCaP）、成肌細胞（C2C12、L6）等。

使用說明：

不同的細胞類型和不同面積的孔板轉染操作略有不同，以六孔板的貼壁細胞DNA轉染為例。
1、細胞準備：轉染前一天將細胞接種至六孔板內，細胞接種數量視其生長速度和細胞系類型而定，一般為0.5-1×106個細胞。轉染時要求細胞生長的匯合度為70-90%，轉染前兩小時對細胞進行換液。（細胞狀態(tài)與轉染效果影響很大，選擇最佳細胞狀態(tài)更有利于轉染效率提高和轉染后細胞狀態(tài)的恢復）
2、將3.75μl和7.5μl的U33-300分別加至另外125μl無血清的OPTI-MEM培養(yǎng)基中，輕輕混勻，室溫靜置2-3min。
3、將5ug質粒DNA(0.5-5μg/μL)加入到250μl無血清OPTI-MEM培養(yǎng)基稀釋，混勻，然后添加10ul B300試劑并充分混勻。
4、在每管已稀釋的U33-300試劑中加入等體積已稀釋的DNA室溫孵育10-15min。
5、將DNA和U33-300混合液滴加至六孔板的孔內，前后左右晃動孔板混勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6、轉染18-48小時后，倒置熒光顯微鏡下觀察熒光蛋白表達，或加入抗性培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定表達細胞系單克隆。

注意事項：

1、轉染siRNA至細胞時，遵循如上所述的DNA實驗方案，但在稀釋siRNA時不要加入B-300試劑。在無血清培養(yǎng)基中制備DNA-U33-300復合物，直接將其加入含細胞培養(yǎng)基的細胞中。

2、轉染后無需去除轉染復合物或者更換/添加培養(yǎng)。

3、整個實驗過程避免細胞污染，由于不同細胞耐受性不同，我們建議您在做批量實驗前，可根據實際質粒和細胞的轉染效率，分不同梯度量先做預實驗，摸索DNA和U33-300 Transfection Reagent 的最佳混合比例。步驟里面測試推薦的兩種濃度的并非固定濃度，優(yōu)化后可根據自身細胞情況調整用量。

4、本產品僅作體外科研使用，不可用于臨床診斷或治療。

5、實驗員請穿實驗服并佩戴一次性手套操作，注意有效防護，請勿接觸人體。

保存方法：

4℃保存，2年有效，切勿凍存。冰袋或者濕冰運輸，短時間內可室溫運輸，但需避免光源熱源。

使用范圍：

僅限科研使用，不能應用于臨床。