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產(chǎn)品描述：

攸碧艾的RNA轉(zhuǎn)染試劑R-100 RNA Transfection Reagent是一種獨(dú)有的RNAi特異性陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，本品適用于將siRNA、microRNA (miRNA)、miRNA mimic、miRNA inhibitor等小片斷RNA轉(zhuǎn)染入動(dòng)物細(xì)胞（包括各種細(xì)胞系、原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞等）。

本產(chǎn)品在多種細(xì)胞系的驗(yàn)證中均表現(xiàn)出優(yōu)秀的RNA轉(zhuǎn)染效率，并且細(xì)胞毒性很低。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、轉(zhuǎn)染效率高，所需RNAi濃度低，基因表達(dá)效果好，非特異性效應(yīng)極少。

2、針對(duì)miRNA拮抗劑和模擬物具有出色的轉(zhuǎn)染效率。

3、細(xì)胞毒性低，易于優(yōu)化，可用于多種細(xì)胞類(lèi)型。

4、簡(jiǎn)單、高通量的即用型轉(zhuǎn)染。

5、可常溫運(yùn)輸。

使用說(shuō)明：

不同的細(xì)胞類(lèi)型和不同面積的孔板轉(zhuǎn)染操作略有不同，以24孔板siRNA轉(zhuǎn)染為例。

1、接種細(xì)胞：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，提前將細(xì)胞接種在24孔板中，過(guò)夜培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁且細(xì)胞匯合度在30%-50%時(shí)轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前全培養(yǎng)基總量為0.45ml。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，數(shù)量為常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)的2/3時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

2、轉(zhuǎn)染步驟：

（1）取一無(wú)菌無(wú)酶離心管加入無(wú)血清稀釋液和0.67ug(50pmol)的siRNA，充分混勻，制成終體積為25μl的RNA稀釋液（無(wú)血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無(wú)血清DMEM或1640），室溫靜置5min。

（2）取另一新的無(wú)菌無(wú)酶離心管加入24ul無(wú)血清稀釋液和1ul的R100，充分混勻，制成終體積為25μl的R100稀釋液，室溫靜置5min。

（3）將R100稀釋液和RNA稀釋液混合并輕輕吹打均勻，室溫靜置15min即完成轉(zhuǎn)染復(fù)合物的制備。

（4）將50μl轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加到含有0.45ml完全培養(yǎng)基（可含10%血清和抗生素）的細(xì)胞上，混合均勻。

（5）轉(zhuǎn)染后6小時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)，如狀態(tài)良好可不必更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24-96小時(shí)得到結(jié)果。

3、優(yōu)化：由于RNA序列差異、合成條件不同以及是否帶有熒光等標(biāo)記，決定了RNA和轉(zhuǎn)染試劑在不同情況下會(huì)有不同的最佳條件，建議先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。根據(jù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果，固定RNA(μg)：轉(zhuǎn)染試劑量(μl)的比值，按培養(yǎng)器皿表面積比例應(yīng)用到其他培養(yǎng)容器。

注意事項(xiàng)：

1、siRNA轉(zhuǎn)染后，繼續(xù)培養(yǎng)24-72小時(shí)在mRNA水平得到結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)24-96小時(shí)在蛋白水平得到結(jié)果。miRNA轉(zhuǎn)染后，根據(jù)需要在24小時(shí)后得到結(jié)果。

2、由于血清和培養(yǎng)條件等差異，轉(zhuǎn)染后在顯微鏡下可能觀察到培養(yǎng)基中出現(xiàn)少量黑點(diǎn)狀沉淀，大概率為轉(zhuǎn)染試劑和血清中蛋白結(jié)合產(chǎn)物，不影響轉(zhuǎn)染結(jié)果和細(xì)胞狀態(tài)，可通過(guò)換液除去。

3、整個(gè)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要注意無(wú)菌操作，避免細(xì)胞被污染污染。

4、由于不同細(xì)胞耐受性不同，建議在做批量實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，設(shè)置梯度用量摸索最佳siRNA和R-100的混合比例。優(yōu)化后可根據(jù)自身細(xì)胞情況決定具體用量。

5、采用本品進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，RNA用質(zhì)量(μg)進(jìn)行計(jì)量，對(duì)于21nt雙鏈的siRNA，1OD=3.0nmol=40μg。

6、siRNA等較短RNA請(qǐng)參照表1中siRNA用量，miRNA、shRNA等較長(zhǎng)RNA請(qǐng)參照表1中miRNA用量。

7、如轉(zhuǎn)染后需要提取RNA，建議轉(zhuǎn)染后6小時(shí)換液。

8、本產(chǎn)品僅作體外科研使用，不可用于臨床診斷或治療。

9、實(shí)驗(yàn)員請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作，建議佩戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)眼鏡。使用時(shí)注意有效防護(hù)，請(qǐng)勿接觸人體，如果不慎接觸，應(yīng)立即用大量的水沖洗，若身體不適應(yīng)立即前往醫(yī)院治療。

保存方法：

4℃保存，2年有效，切勿凍存。冰袋或者濕冰運(yùn)輸，短時(shí)間內(nèi)可室溫運(yùn)輸，但需避免光源熱源。

使用范圍：

僅限科研使用，不能應(yīng)用于臨床。

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