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產(chǎn)品描述：

CCK-8（Cell Count Kit-8）是一種利用WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）快速檢測細胞增殖或毒性試驗的方法。WST-8是一種類似MTT的四唑鹽，在電子耦合試劑的存在下，被活細胞內(nèi)的脫氫酶還原生成水溶性的橙黃色Formazan（甲臜），通過比色法檢測甲臜生成量可以反映試驗中活細胞的數(shù)量。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

本試劑盒可以用于細胞增殖檢測，也可以用于細胞毒性檢測，或細胞生長抑制檢測。本試劑盒檢測非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無須再進行任何配制等操作。無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外的步驟去溶解Formazan�？梢杂糜诖笈繕悠返臋z測。酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。

WST-8對細胞無明顯毒性。加入CCK-8溶液顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標儀讀板，使檢測時間更加靈活，便于找到最佳測定時間。

按照每個樣本需要10μl CCK-8試劑，5 ml規(guī)格的本試劑盒可以測定500個樣品，5×5 ml規(guī)格可以測定2500個樣品，10×5ml規(guī)格可以測定5000個樣品，25×5ml規(guī)格可以測定12,500個樣品。

使用說明：

1、接種對數(shù)期的細胞至96孔板，接種數(shù)量1-5×103個/孔，每孔100μl，每組設(shè)置3-5個復(fù)孔，置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

2、待細胞貼壁后，加入不同濃度的藥物處理細胞，置于培養(yǎng)箱中孵育一定的時間（如24h、48h、72h）；

3、每孔加入10μl的CCK-8試劑，輕輕混勻，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育1-4h（大多數(shù)細胞孵育1h即可，具體孵育時間根據(jù)細胞類型和細胞密度等實驗情況決定，可進行預(yù)實驗確定孵育時間）；

4、將孵育后的細胞培養(yǎng)板置于酶標儀上，在450nm處檢測其吸光值。

注意事項：

1、使用前先將低溫保存的試劑在室溫條件下放置20-30min。

2、接種對數(shù)期生長的細胞，注意使細胞分散均勻，確保每個復(fù)孔中的細胞數(shù)量一致，減少誤差。

3、為了達到最佳的實驗效果，建議先進行預(yù)實驗，確定最佳的細胞接種密度及CCK-8試劑孵育時間。以貼壁細胞為例，接種密度約1-5×103個/孔；孵育時間為1-4h，多數(shù)細胞孵育約30min即可觀察到明顯的顏色變化。

4、設(shè)置空白對照，在無細胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8檢測，去除本底對吸光值的干擾。

5、如果OD值太高， 建議降低細胞接種密度或減少CCK-8試劑孵育時間；如果OD值太低，建議增加細胞接種密度或延長CCK-8試劑孵育時間。

6、使用96孔板進行CCK-8檢測時，如果細胞培養(yǎng)時間較長，要注意96孔板蒸發(fā)問題�？梢栽诖龣z測細胞的周圍一圈孔中加相同量的PBS、水或培養(yǎng)液，同時把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方以緩解蒸發(fā)。

7、本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化反應(yīng)，所以還原劑的存在會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需要設(shè)法提前去除。

8、用酶標儀檢測前要確保96孔板內(nèi)沒有氣泡，否則會影響檢測結(jié)果。

9、本產(chǎn)品僅作體外科研使用，不可用于臨床診斷或治療。

10、實驗員請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

保存方法：

4℃保存，一年有效；-20℃保存，兩年有效。

使用范圍：

僅限科研使用，不能應(yīng)用于臨床。

為確保信息準確，建議您以隨產(chǎn)品附帶的紙質(zhì)說明書為準。電子文檔內(nèi)容可能因版本更新而存在延遲，僅供參考。