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實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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新聞資訊
細(xì)胞衰老（cellular senescence）是細(xì)胞在經(jīng)歷一定增殖周期或外界應(yīng)激后，進(jìn)入不可逆的生長停滯狀態(tài)。衰老的一般特征是慢性DNA損傷應(yīng)答（DDR）激活、細(xì)胞周期停滯、促炎因子和組織重塑因子的分泌增強(qiáng)、抗凋亡、代謝改變和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。衰老細(xì)胞往往表現(xiàn)出特征性的結(jié)構(gòu)改變，包括細(xì)胞增大和扁平、溶酶體和線粒體堆積、細(xì)胞核變化以及質(zhì)膜改變。
在細(xì)胞衰老過程中，SA-β-gal（Senescence-associated β-galactosidase，β-半乳糖苷酶）的活性在pH 6左右的酸性條件下顯著增加，而在正�；虬┳兗�(xì)胞中，這種活性要么不存在，要么非常低。這種活性的增加不是由于酶量的增加，而是與細(xì)胞衰老狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的變化有關(guān)。該酶能水解X-gal，產(chǎn)生藍(lán)色不溶性產(chǎn)物，在光學(xué)顯微鏡下可見。通過著色反應(yīng)，觀察細(xì)胞是否呈現(xiàn)藍(lán)色，可以判斷細(xì)胞是否處于衰老狀態(tài)。正常增殖的細(xì)胞或早期癌細(xì)胞通常不表現(xiàn)出這種藍(lán)色著色，而衰老細(xì)胞則會顯示出明顯的藍(lán)色著色。
（一）貼壁細(xì)胞
1、固定：在6孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞上吸去培養(yǎng)液，PBS清洗，然后加入4%多聚甲醛室溫固定15分鐘。
2、染色：PBS清洗3次，每次3分鐘，每孔加入SA-β-gal染色液1ml，37℃孵育過夜（可覆上保鮮膜防止干燥）。
3、觀察：使用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞并拍照記錄。如果不能及時(shí)觀察或計(jì)數(shù)，可以去除染色液，加入2ml PBS在4℃下可以保存數(shù)天；或者去除染色液，加上封片液封片，4℃可以保存更久。
（二）懸浮細(xì)胞
1、固定：離心收集細(xì)胞至1.5ml離心管內(nèi)，PBS清洗一次，加1ml多聚甲醛室溫固定15 min（固定時(shí)可在搖床上緩慢搖動(dòng)，以避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)）。
2、染色：離心吸棄上清，PBS清洗3次，每次3 min。每管加入0.5-1ml SA-β-gal染色液，37℃孵育過夜。
3、觀察：取部分染色后的細(xì)胞，滴到載玻片上或孔板內(nèi)，在光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照記錄。如國不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以離心去除染色工作液，加入1ml PBS在4 ℃可以保存數(shù)天。如果離心，取細(xì)胞涂片，加上封片液封片，4℃可以保存更久。
（三）組織樣本
1、固定：將組織制備成冰凍切片后，讓切片復(fù)溫。使用PBS清洗切片3次，每次持續(xù)5分鐘。用免疫組化筆在組織周圍畫圈，然后加入足夠覆蓋組織的4%多聚甲醛固定30min。PBS清洗3次，每次8分鐘。
2、染色：每片組織上加30μl的SA-β-gal染色液，確保切片完全浸沒于染色液中，37℃孵育過夜（可覆上保鮮膜防止干燥）。
3、觀察：去染色液，加封片液封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照記錄。
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