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實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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新聞資訊
血管生成（Angiogenesis）是從已有毛細(xì)血管或微靜脈形成新血管的過程，受促血管因子（如VEGF、bFGF）與抑制因子（如內(nèi)皮抑素）的動(dòng)態(tài)平衡調(diào)控。失衡會(huì)導(dǎo)致病理狀態(tài)，一種是過量血管生成，比如腫瘤轉(zhuǎn)移、糖尿病視網(wǎng)膜病變；另一種是血管生成不足，比如心肌梗死、慢性傷口。
內(nèi)皮細(xì)胞保留了分裂和快速遷移的能力，可響應(yīng)血管生成信號(hào)。內(nèi)皮細(xì)胞在特定基質(zhì)膠上受生長(zhǎng)因子（如VEGF）刺激后，通過遷移、增殖和連接形成管狀網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，這一過程可直觀反映血管生成的動(dòng)態(tài)變化，常用于藥物篩選、腫瘤研究和信號(hào)通路研究。
1、基質(zhì)膠鋪板：Matrigel基質(zhì)膠（濃度≥10 mg/mL，提前4℃過夜解凍）按1:1比例與預(yù)冷培養(yǎng)基混合，垂直滴加到預(yù)冷96孔板，每孔50μL，4℃靜置10分鐘使膠均勻分布，37℃孵育30分鐘固化。
2、細(xì)胞接種：選用低傳代（2-8代)內(nèi)皮細(xì)胞如HUVEC，無血清饑餓處理16-24h，消化后重懸至2×105cells/mL，每孔加50ul細(xì)胞懸液(約105個(gè)細(xì)胞），并加入含VEGF（5-10ng/mL）的培養(yǎng)基至滿孔。
3、培養(yǎng)與觀察：37℃、5% CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)培養(yǎng)，HUVEC在4–12小時(shí)成管（原代細(xì)胞延至18小時(shí)），按照細(xì)胞生長(zhǎng)速度定時(shí)觀察拍照、留存圖像�？稍�6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)分別采集圖像。也可在熒光染色后對(duì)其進(jìn)行熒光觀察。
1、不同細(xì)胞類型需調(diào)整密度，建議預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳條件。
2、與基質(zhì)膠接觸的所有培養(yǎng)器皿、耗材和培養(yǎng)液都要預(yù)冷，基質(zhì)膠孵育前始終置于冰上。
3、槍頭垂直加樣，輕柔混勻避免出現(xiàn)氣泡，如有氣泡形成可4℃離心（300×g, 10min）去除氣泡。
4、鋪膠后冰上4℃靜置10分鐘再孵育，確保膠均勻平整。
5、超過24小時(shí)管狀結(jié)構(gòu)退化，需在峰值時(shí)間用4%多聚甲醛固定。
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