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實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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新聞資訊
細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)是一種體外模擬細(xì)胞穿透基底膜（如細(xì)胞外基質(zhì)ECM）進(jìn)入周圍組織或血管系統(tǒng)的技術(shù)，主要用于研究腫瘤轉(zhuǎn)移、炎癥反應(yīng)及傷口修復(fù)等過(guò)程中細(xì)胞的侵襲能力。該實(shí)驗(yàn)通過(guò)量化細(xì)胞穿過(guò)人工基底膜（如Matrigel）的數(shù)量，評(píng)估細(xì)胞在趨化因子誘導(dǎo)下的主動(dòng)遷移和基質(zhì)降解能力。
1、基質(zhì)膠鋪板
在冰上用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋Matrigel基質(zhì)膠（提前4℃過(guò)夜解凍）至1mg/mL，取60μl稀釋后的Matrigel基質(zhì)膠垂直加入Transwell上室，均勻鋪平避免氣泡。37℃孵育1–3h固化，吸除未結(jié)合膠體，加入100μL無(wú)血清培養(yǎng)基37℃水化30min。（注意所有與基質(zhì)膠接觸的槍頭、EP管和transwell孔板等耗材提前4℃預(yù)冷30min）
2、細(xì)胞接種
胰酶消化細(xì)胞（提前12-24h饑餓處理），無(wú)血清培養(yǎng)基重懸，調(diào)整密度（通常1–5×10⁵個(gè)/孔，需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化）。
上室加入200μL細(xì)胞懸液，下室加入600–800μL含10%-20%FBS的完全培養(yǎng)基（避免產(chǎn)生氣泡），37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中孵育24–48小時(shí)（時(shí)間依細(xì)胞侵襲能力而定）。
3、固定與染色
PBS清洗，棉簽輕柔擦除上室未侵襲細(xì)胞。4%多聚甲醛固定30分鐘，0.1%結(jié)晶紫染色10–15分鐘，PBS漂洗。
4、觀察記錄：顯微鏡下隨機(jī)選取5–10個(gè)視野拍照，計(jì)數(shù)下室膜表面的細(xì)胞，取平均值比較組間差異。
1、基質(zhì)膠全程冰上使用，避免室溫凝固；分裝凍存減少反復(fù)凍融。鋪膠需均勻無(wú)氣泡，厚度影響侵襲效率（常用1mg/mL濃度）。
2、小室放入下室時(shí)避免氣泡阻隔趨化作用，若有氣泡需重新放置。
3、細(xì)胞密度過(guò)高易假陽(yáng)性，過(guò)低則統(tǒng)計(jì)意義不足；需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化接種量及孵育時(shí)間。
4、擦除未侵襲細(xì)胞時(shí)棉簽擦拭力度需輕柔，避免損傷已穿膜細(xì)胞。
5、必設(shè)空白對(duì)照（無(wú)細(xì)胞）及遷移對(duì)照（無(wú)基質(zhì)膠的Transwell實(shí)驗(yàn)）。
6、若細(xì)胞侵襲能力弱，可延長(zhǎng)饑餓時(shí)間或增加下室血清濃度。
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