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實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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新聞資訊
耐藥細(xì)胞株構(gòu)建一般采用體外低濃度梯度遞增聯(lián)合大劑量間斷沖擊方法誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對(duì)特定藥物產(chǎn)生耐藥性，從而建立相應(yīng)的藥物耐藥細(xì)胞株，旨在模擬腫瘤細(xì)胞在化療壓力下逐漸獲得生存優(yōu)勢(shì)的過程。
1、測(cè)定初始IC50：選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好、無支原體污染且處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞作為親本細(xì)胞，使用MTT法或CCK-8法測(cè)定目標(biāo)藥物對(duì)親本細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC50）。
2、藥物誘導(dǎo)處理：采用藥物濃度遞增聯(lián)合大劑量間歇沖擊法誘導(dǎo)處理細(xì)胞，在誘導(dǎo)過程中定期取樣，用MTT/CCK-8法檢測(cè)當(dāng)前細(xì)胞群的IC50，計(jì)算耐藥指數(shù)（Resistance Index, RI），RI=耐藥細(xì)胞IC50/ 親本細(xì)胞IC50，RI>5時(shí)通常表明耐藥細(xì)胞系構(gòu)建成功。
3、穩(wěn)定傳代與保種：當(dāng)細(xì)胞能在特定高濃度藥物下穩(wěn)定生長(zhǎng)且RI值符合要求時(shí)，可嘗試在不含藥物的培養(yǎng)基中傳代3代以上。如果其耐藥性沒有顯著降低，表明獲得了穩(wěn)定的耐藥細(xì)胞系，可以進(jìn)行大量擴(kuò)增和凍存保種。
4、 耐藥驗(yàn)證：通過Western Blot、羅丹明123外排實(shí)驗(yàn)、qPCR/轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)?gòu)建好的細(xì)胞系進(jìn)行功能性驗(yàn)證。
1、客戶需要提供生長(zhǎng)狀況良好的宿主細(xì)胞株，以及細(xì)胞特性、培養(yǎng)條件和相關(guān)注意事項(xiàng)。
2、客戶提供相關(guān)誘導(dǎo)劑。
1、提交實(shí)驗(yàn)報(bào)告書（耐藥指數(shù)、實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備、實(shí)驗(yàn)過程、結(jié)果分析、原始數(shù)據(jù)、細(xì)胞圖片等）。
2、耐藥細(xì)胞株、親本細(xì)胞株。
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